点击标题下“中华实用诊断与治疗杂志”可快速 采用免疫组织化学法检测3组大鼠海马组织蛋白激酶CK2a蛋白表达情况，按免疫组织化学试剂盒说明书进行操作。蛋白激酶CK2α免疫组织化学染色阳性为棕黄色或黄色，其阳性细胞的灰度值采用HPIAS-0病理图文报告分析系统测定，相对含量为细胞的平均灰度值。平均灰度值为图像透光率，蛋白激酶CK2a含量高，透光率低，染色较深，灰度值较低；蛋白激酶CK2a含量低，透光率高，染色较浅，灰度值较高。
1.2.6大鼠海马组织蛋白激酶CK2a免疫荧光检查
3组大鼠海马组织冰冻切片复温，进行免疫荧光染色，一抗为兔抗大鼠CK2a多克隆抗体，二抗为生物素标记二抗，DAPI染核，中性树胶封片后，免疫荧光显微镜拍照观察，蛋白激酶CK2a免疫荧光染色阳性为红色，分布在细胞核周围。
1.3统计学处理应用SPSS20.O软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，多组间比较采用方差分析，2组间比较采用t检验；检验水准a=0.05。
2结果
2.13组大鼠呼吸频率和心率比较麻醉后，3组大鼠呼吸频率和心率比较差异无统计学意义(P0.05)。体外循环10min时，深低温停循环组大鼠呼吸频率和心率均低于常温不停循环组和常温停循环组(P0.05)，常温停循环组大鼠呼吸频率和心率与常温不停循环组比较差异无统计学意义(P0.05)。体外停循环10min时，深低温停循环组大鼠呼吸频率和心率均低于常温不停循环组和常温停循环组(P0.05)，常温停循环组大鼠呼吸频率和心率低于常温不停循环组(P0.05)。3组大鼠模型均建造成功。见表1。
2.23组大鼠海马组织组织病理学检查结果常温不停循环组和深低温停循环组大鼠神经细胞和椎体细胞形态和数量均正常，未见缺血性改变;常温停循环组大鼠少量神经元肿胀、变性，可见少量胶质细胞增生和少量炎性细胞浸润，呈轻度缺血性改变。见图1。
2.33组大鼠海马组织蛋白激酶CK2a表达情况蛋白激酶CK2a免疫阳性物质定位在神经元细胞质中，主要位于海马脑下脚散在细胞，阳性细胞为棕黄色。常温不停循环组大鼠海马组织有极少量蛋白激酶CK2a表达；常温停循环组大鼠海马组织有大量蛋白激酶CK2a表达；深低温停循环组大鼠海马组织有少量蛋白激酶CK2a表达。常温停循环组大鼠海马组织蛋白激酶CK2a灰度值(99.54±3.28)低于常温不停循环组(.43±8.86)和深低温停循环组(.65±8.02)(PO.05)，深低温停循环组低于常温不停循环组(P0.05)。见图2。
2.43组大鼠海马组织蛋白激酶CK2a免疫荧光情况大鼠海马组织中蛋白激酶CK2a阳性物质位于细胞质中，呈红色染色。常温不停循环组大鼠海马组织中有极少量蛋白激酶CK2a表达，常温停循环组大鼠海马组织中有大量蛋白激酶CK2a表达，深低温停循环组大鼠海马组织中有少量蛋白激酶CK2a表达。见图3。
3讨论
脑组织的代谢随人体温度降低而下降，在低温条件下细胞内的需氧酶反应受抑制，对缺氧的耐受增强，大脑温度越低，脑组织对缺血缺氧的耐受越强，脑保护作用越明显。低温脑保护作用的机制可能为低温能降低脑组织的代谢率，增强对缺血缺氧的耐受；调节脑血流；减少自由基生成；减少细胞内钙超载；减少脂质过氧化；促进神经元泛素合成；抑制谷氨酸等兴奋性递质合成；减轻脑水肿等。深低温对脑组织有保护作用，本研究结果显示，常温不停循环组大鼠神经细胞和椎体细胞形态和数量正常，未见缺血性改变；常温停循环组大鼠少量神经元肿胀、变性，见少量胶质细胞增生和少量炎性细胞浸润，呈轻度缺血性改变；深低温停循环组大鼠神经细胞和椎体细胞形态及数量也正常，未见缺血性改变。表明常温下停循环10min大鼠海马组织出现缺血性改变，深低温停循环10min大鼠海马组织未见缺血性改变，进一步证明了深低温对脑组织有保护作用。
蛋白激酶CK2a在多种真核生物中分布较广泛，主要分布于高分化、高增殖细胞，且高度保守，具有多种生理功能，蛋白激酶CK2a的底物具有多样性，这些底物参与细胞的增殖、分化、细胞的代谢和运动、DNA转录、RNA加工蛋白质翻译、抑癌基因和癌基因调节等。研究结果认为，蛋白激酶CK2a是原癌基因，参与肿瘤的发生、发展。蛋白激酶CK2a在大脑神经元中也有分布，对神经元的生长、凋亡、周期调控、突触形成和传递及神经营养等发挥重要作用。本研究结果显示，常温不停循环组大鼠海马组织中有极少量蛋白激酶CK2a表达，常温停循环组大鼠海马组织中有大量蛋白激酶CK2a表达，深低温停循环组大鼠海马组织中有少量蛋白激酶CK2a表达。常温停循环组大鼠海马组织中蛋白激酶CK2a灰度值低于常温不停循环组和深低温停循环组大鼠，深低温停循环组大鼠海马组织中蛋白激酶CK2a灰度值低于常温不停循环组，差异均有统计学意义，表明停循环可引起海马组织中蛋白激酶CK2a含量升高，深低温能降低停循环状态下海马组织中蛋白激酶CK2a含量，发挥一定脑保护作用。
本研究结果提示，蛋白激酶CK2a是脑组织的损伤因子，在脑组织损伤中发挥一定作用，深低温能抑制海马组织中蛋白激酶CK2a表达，降低对神经细胞的损伤。蛋白激酶CK2a对神经细胞营养因子合成、生物信号传导、细胞增殖、神经元突触形成和信息传递等发挥重要作用，深低温条件下海马组织中蛋白激酶CK2a水平降低能降低钙内流、抑制毒性代谢产物生成、降低代谢率等减少脑组织的损伤，蛋白激酶CK2a具有抗损伤和促损伤的双重作用，在神经元受损伤时发挥对神经元的保护作用。
参考文献：略
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